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當前位置:首頁產品中心科研細胞細胞系DT40 (雞淋巴瘤細胞)
DT40 (雞淋巴瘤細胞)

產品簡介

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產品廠地:上海市
更新時間:2025-02-17
廠商性質:經銷商
訪問量:444
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品牌其他品牌貨號GOY-01X0543
規格1×10?cells/T25培養瓶供貨周期現貨
主要用途產品僅供科研使用應用領域化工

產品屬性: 

產品名稱

規格

貨號

DT40 (雞淋巴瘤細胞)

1×10?cells/T25培養瓶

GOY-01X0543

商品介紹:

名稱    DT40 (雞淋巴瘤細胞) 

別稱DT-40; DT 40; DT40B; LSCC-DT40

年齡(性別)1日齡

組織來源法氏囊,淋巴瘤

生長特性懸浮細胞

細胞形態淋巴母細胞樣

背景描述DT40細胞是Hyline SC雞法氏囊淋巴細胞株經鳥類白血病病毒誘導建株的細胞系。原始淋巴瘤用羅氏相關病毒1(RAV-1)感染出生1天的小雞得到,法氏囊中生成的腫瘤制成細胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體小雞。經過一次體內移植后,建立了DT40細胞。DT40細胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游,表達的c-myc RNA水平較高。DT40細胞缺少一個正常c-myc基因,但含有兩個拷貝ALV去調控的myc基因。DT40細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力。在IgL位點,DT40包含一個重排和一個胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細胞中都能誘導組織相容性(MHC)Ⅱ類抗原表達。v-rel誘導的MHCⅡ表達比c-rel誘導快,且其有效性在數周后達到c-rel50倍。DT40細胞呈淋巴母細胞表型;傳染性檢測表明,DT40細胞釋放低水平的傳染性RAV-1,DT40細胞株可以用于穩轉研究。

生物安全等級1

生長培養基DMEM0.05mM β-mercaptoethanol10% Tryptose Phosphate Broth5% Chicken Serum10% FBS1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3/

倍增時間~48 hours

凍存條件

凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養條件

氣相:空氣,95%CO2,5%

溫度:37℃

冷凍保存細胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

QQ截圖20210907103850.png

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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