人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基

人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫(xiě)上細(xì)胞名稱(chēng)、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿(mǎn)異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買(mǎi)已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類(lèi)型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。

豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA pcr檢測(cè)試劑盒

Human cytokeratin 18 (CK-18) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白18(CK-18)試劑盒

Humanmicroansferrinuria,MTFELISAKit 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

HumanCyclinDependeKinase5,CDK5試劑盒人周期素依賴(lài)性激酶5(CDK5)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織FGFR4激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanPresenilin2,PS-2ELISAKit人早老素2(PS-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔子雌二醇(E2)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor (VEGF) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒

Humanai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 人抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESF試劑盒人紅細(xì)胞刺激因子(ESF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織RSK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanOsteopoin,OPNELISAKit人骨橋素(OPN)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人轉(zhuǎn)錄因子   英文名稱(chēng)：   Human Engrailed-2   英文縮寫(xiě)：   

E選擇素   英文名稱(chēng)：   Human E selectin   英文縮寫(xiě)：   

上皮鈣粘蛋白   英文名稱(chēng)：   Human E.cadherin   英文縮寫(xiě)：   

內(nèi)皮素受體A   英文名稱(chēng)：   Human Endothelin Receptor A   英文縮寫(xiě)：   EA

Ras樣蛋白A抗體

磷酸化p38MAPK抗體

ARSA重組小鼠 Arylsulfatase A / ARSA 蛋白 Protein

c-Myc tag c-Myc tag標(biāo)簽多肽 0.5mgc-Myc tag c-Myc tag標(biāo)簽多肽

YWHAH重組人 14-3-3 eta / YWHAH 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

IL2RG Protein Human 重組人 IL2RG / CD132 蛋白

RTN4R Protein Mouse 重組小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白

人原代真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基c-Myc tag c-Myc tag標(biāo)簽多肽 0.5mgc-Myc tag c-Myc tag標(biāo)簽多肽

IL2RG Protein Human 重組人 IL2RG / CD132 蛋白

ARSA重組小鼠 Arylsulfatase A / ARSA 蛋白 Protein

RTN4R Protein Mouse 重組小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白

YWHAH重組人 14-3-3 eta / YWHAH 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein